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一文读懂支原体污染和防治

发表时间：2022-06-16 10:00作者：Spec东小创
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支原体污染有哪些危害？
支原体（mycoplasma）污染对细胞培养造成多方面的不良影响，已经成为细胞培养中的一个严重问题。支原体污染后会改变细胞膜状态、使细胞的生长速度减慢或停止、破坏细胞染色质、改变细胞的酶谱、细胞膜成分、降低转染/转导效率、影响基因表达。保守估计国内常规细胞培养中支原体污染率超过50%，严重干扰细胞生长及实验结果的可信度。
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什么情况下可能是支原体污染？
细胞生长突然变慢、状态变差、细胞边界变得模糊。而培养条件没变，又没有明显的污染迹象（浑浊、pH等）。

如何确定有支原体污染？
因为支原体大小为0.1-0.3um，光镜下不可见。可通过支原体16srRNA 基因保守区域设计引物进行PCR扩增检测，此法以快速、灵敏、特异性高、检测范围广等特点深受广大科研工作者的认可，可用于细胞、培养基及血清中的支原体污染检测。支原体检测试剂盒（Cat No：MT01A）
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如何清除支原体污染？
支原体没有刚性的细胞壁，因此普通的抗生素对它根本不起作用，需要用到专门的支原体清除试剂。支原体去除试剂盒（Cat : ME01A）

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如何预防支原体污染？
规避污染源：
①细胞之间交叉污染；                                     
②工作环境或实验器材的污染；                       
③实验者无菌操作不佳；
④培养基或其他试剂污染；
⑤制备细胞的原始组织或器官的污染。
定期对实验室的细胞进行支原体检测，可以做到早发现早处理~


赛库支原体检测试剂套装：

组分

体积

MycoScan PCR Master Mix 2X

625μL

MycoScan Positive Control 1X

25μL

使用方法

1． 样品前处理：

细胞正常培养2天（3天效果更佳）后，吸取1mL培养上清，3000rpm离心5min，使细胞碎片沉淀。收集500μL上清至一新的1.5mL离心管，100℃沸水浴10min以裂解支原体释放DNA。冷却至室温以进行下一步骤。

2. PCR反应

   1）反应体系

    2X PCR Mix   12.5 μL

收集的上清裂解液 2.5μL

   无菌水 定容至25μL

注：整个检测体系中应加入阳性及阴性对照，阳性对照随试剂盒附赠，阴性对照建议使用新鲜的基础培养基或灭菌水。阳性对照上样1μL即可。

2）反应条件(40个循环）

94℃ 2min

    94℃ 30sec

        55℃ 15sec      

        72℃ 30sec

        72℃ 5min

3. 电泳检测

1.5-2%琼脂糖电泳检测，280bp处出现条带为阳性结果，没有条带则为阴性结果。


赛库支原体清除试剂：

组分

规格

MycoFree Mycoplasma Elimination Reagent

125mg

MycoFree Mycoplasma Elimination Reagent

125mg ×5

使用方法

在无菌条件下，把一管去除试剂粉末（125mg）加入10ml灭菌水，振荡溶解，配成100X储存液，过滤分装后-20℃保存。使用时按1:100的比例加至培养基中，配制成1×的工作培养基。

细胞传代时，离心去除培养上清后，用1X的工作培养基正常培养及传代1-2周。传代时用PBS洗细胞1-2次可提高支原体清除效率。


深圳东创实验是赛库细胞的授权代理商，如需了解更多产品信息，请联系我们　~


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